media untuk haemophilus sp

A.      HAEMOPHILUS SP

Haemophilus merupakan merupakan golongan bakteri kecil, gram-negatif pleomorfik,untuk mengisolasikannya dibutuhkan perbenihan diperkaya yang biasanya mengandung darah atau turunannya.Dari genus Haemophilus disebut haemophilic karena bakteri golongan ini membutuhkan faktor pertumbuhan yang terdapat di dalam darah.

Haemophilus sp

Kingdom	Bacteria
Phylum	Proteobacteria
Class	Gamma Proteobacteria
Ordo	Pasteurellales
Family	Pasteurellaceae
Genus	Haemophilus
Spesies	H. influenzae H. aegyptius H. aphrophilus H. ducrey H. haemoglobinophilus H. haemolitycus H. parainfluenzae

Haemophilus influenzae grup B (HiB) merupakan penyebab penyakit yang penting pada manusia. Haemophilus influenza termasuk bakteri patogen respiratori pada nasofaring anak – anak dan orang tua. Bakteri ini mempunyai kapsul, tidak bergerak, Gram negatif, dan berbentuk seperti tongkat (coccobacillus). Bakteri ini bersifat anaerob fakultatif dan untuk pertumbuhannya di media kultur membutuhkan faktor X (hemin, untuk mensintesis enzym yang mengandung heme seperti sitokrom, katalase dan oksidase) dan faktor V (NAD atau NADP). H. influenzae B hanya ditemukan pada manusia. Bakteri ini dapat ditemukan di saluran nafas bagian atas pada 0,5-3% anak-anak. WHO memperkirakan di negara yang tidak memberlakukan imunisasi HiB, HiB dapat ditemukan pada 30% anak. Meskipun mereka mungkin tidak menunjukkan gejala klinis, namun mereka dapat menularkan bakteri ini ke sekitarnya. Bakteri ini menyebar melalui kontak langsung, atau melalui droplet pernafasan.Infeksi H. influenza sering ditemukan pada anak usia 6 bulan sampai 4-5 tahun. Bakteri ini dapat melakukan invasi memasuki pembuluh darah. Bakteri ini dapat menyebabkan meningitis (paling sering), epiglottitis, pneunomia, empyema, artritis septik, osteomyelitis, perikarditis, selulitis, otitis media, dan sinusitis. Infeksi pada orang dewasa biasanya merupakan infeksi sekunder karena ada penurunan daya tahan tubuh.

B.       MEDIA

Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran nutrisi/zat makanan yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri.

1.         Media transport untuk Haemophilus sp.

a.       Media Stuart

Ditemukan oleh Dr. R.D Stuart,merupakan media transport sampel swab pertama.

Komposisi media :

Sodium Glycerophosphate        10.0 g

Calcium Chloride                      0.1 g

Mercaptoacetic Acid               1.0 ml

Distilled Water                       1.0 liter

Cara pembutan

1)      larutkan 14.1 gram medium dalam satu liter air suling.

2)      Panaskan sambil diaduk  hingga mendidih satu menit.

3)      Masukkan kedalam botol atau tabung bertutup ulir,

4)      Sterilkan dengan autoclave 121ᴼC selam 15 menit.

5)      Diamkan pada suhu kamar

b.      Media Cary Blair

Media Cary Blair adalah modifikasi dari Media Stuart asli,tapi khusus dipakai untuk media transport dari sampel untuk isolasi kuman pathogen

                             

Komposisi media :

Disodium Hydrogen Phosphate           1.10 g

Sodium Thioglycollate                       1.50 g

Sodium Chloride                                5.00 g

Calcium Chloride                                0.09 g

Bacteriological Agar                          5.60 g

Distilled Water                                 1.0 liter

Cara pembuatan :

1)      Timbang  1,5 g Sodium Thioglycollate

2)      1,1 g Disodium Hydrogen Phosphate , 5 g Bacteriological Agar , larutkan dengan aquadest  990 ml , diamkan pada suhu 50ᴼ C dan tambahkan 9 ml larutan  Calcium Chloride 1 %

3)      Sesuaikan pHnya menjadi 8,4.

4)      Masukkan 7 – 10 ml kedalam botol bertutup ulir

5)      Sterilkan dengan Autoclave selama 15 menit.simpan pada suhu kamar

        

                    

c.       Media Ameis

Amies medium merupakan modifikasi dari media Stuart.Glycerophosphate ini digantikan oleh fosfat anorganik dan metilen biru dengan arang farmakologis.

Kalsium dan magnessium juga ditambahkan, dengan demikian

mempertahankan permeabilitas sel bakteri.Media ini telah mendukung kelangsungan hidup organisme seperti Trichonomas sp, sp Neisseira.., Haemophilus sp, Corynebacteria, streptococus, Enterobacteriaceae, dll untuk 3 hari, meskipun pemulihan mikroorganisme lebih baik jika berbudaya dalam 24 jam pertama.Transport Amies tersedia dengan atau tanpa arang.
Kapas telah disterilkan oleh irradation.

                                                  

Komposisi Media :

Sodium Chloride                                3.00 g

Potassium Chloride                            0.20 g

Calcium Chloride                                0.10 g

Magnesium Chloride                           0.10 g

Monopotassium Phosphate                  0.20 g

Disodium Phosphate                           1.15 g

Sodium Thioglycollate                        1.00 g

Distilled Water                                  1.00 liter

2.      Media Isolasi untuk Haemophilus sp.

a.       Media Chocolate Agar

Agar Chocolate adalah medium pertumbuhan non-selektif diperkaya. Ini adalah varian dari plat agar darah. Ini berisi sel-sel darah merah, yang telah segaris dengan pemanasan sangat lambat sampai 56 ° C. Agar Cokelat digunakan untuk bakteri pernafasan, seperti Haemophilus influenzae. Bakteri ini membutuhkan faktor pertumbuhan, seperti NAD dan hematin, yang berada di dalam sel darah merah, Agar coklat sama seperti agar darah tetapi pada agar coklat,darah yang digunakan di lisiskan terlebih dahulu sebelum dimasukan ke larutan agar. Setelah darah lisis sel eritrosit mengeluarkan bahan-bahan intraseluler seperti haemoglobin, hemin,dan koenzim nicotinamide adenine dinucleotida (NAD) yang dapat digunakan oleh bakteri yang sukar tumbuh. Darah yang lisis memberikan warna coklat pada media sehingga disebut dengan agar coklat. Biasanya bakteri patogen yang tumbuh pada media agar coklat yaitu: Neisseria meningitidis ,Haemophilus spp (terlibat dalam infeksi saluran pernafasan dan telinga)

                

        Haemophilus sp. culture on chocolate agar

                    

Haemophilus influenzae colonies growing on Chocolate Agar  Incubated in CO₂ for 24 hours at 35 deg. C.

Komposisi Media :

Proteose Peptone                                       15.0gm

Sodium Chloride                                         5.0gm

Dipotassium Phosphate                               4.0gm

Monopotassium Phosphate                           1.0gm

Corn Starch                                               1.0gm

                      Hemoglobin, Bovine                                    10.0gm

KoEnzyme Enrichment                                10.0ml

Agar                                                          10.0gm

Cara Pembuatan :

1)      Chocolate Agar Cairkan Nutrient Agar sterildengan cara di autoclave pada suhu 75°C

2)       Tambahkan darah kedalam Nutrient Agar  cair tersebut dan biarkan di suhu 75°C,

3)      setelah itu campur sampai Homogen ditandai warna coklat yang merata

4)      Masukkan kedalam petri atau kedalam tabung Reaksi  sesuai keinginan biarkan pada suhu kamar beberpa menit sampai media memadat